Nouveau kit Cayman pour le dosage précis de l’activité cellulaire des caspases-3/7

Introduction

Les caspases sont une famille de protéases à cystéine spécifiques de l’aspartate, qui sont des médiateurs clés de l’apoptose et de l’inflammation, mais qui jouent également des rôles dans la pyroptose, la nécroptose et l’autophagie.^1-4 Les caspases participant à l’apoptose sont classées en caspases initiatrices (caspase-2, -8, -9 et -10) ou en caspases exécutrices/effector (caspase-3, -6 et -7). La forme précurseur de toutes les caspases est composée d’un pro-domaine, qui doit être clivé pour activer la caspase, et de grandes et petites sous-unités catalytiques, qui s’associent en un tétramère pour former l’enzyme active. Les caspases-3 et -7 sont exprimées de manière ubiquitaire et peuvent être activées par les voies apoptotiques extrinsèques ou intrinsèques via le clivage par les caspases-8 ou -9, respectivement, ou par la voie de la granzyme B.^5-7 Le site classique de clivage des substrats pour les caspases-3 et -7 est Asp-Glu-Val-Asp (DEVD), avec un clivage après le second aspartate.¹ Ces caspases agissent sur plusieurs substrats, dont la poly(ADP-ribose) polymérase (PARP), la protéine kinase de l’ADN (DNA-PK), la protéine spécifique de l’arrêt de croissance 2 (GAS2), et la procaspase-6.¹ L’activation de ces caspases représente l’étape fonctionnelle finale de la cascade apoptotique et est utilisée comme marqueur de l’apoptose.^7-9 Les caspases-3 et -7 sont des cibles thérapeutiques pour plusieurs maladies telles que le cancer, l’insuffisance cardiaque et les maladies neurodégénératives.

Dans le cadre de son engagement à fournir les meilleurs outils de recherche, Cayman a redéveloppé son kit historique (Caspase-3/7 Fluorescence Assay Kit (Item No. 10009135)). Le nouveau kit se nomme désormais Caspase-3/7 Cell-Based Activity Assay Kit (Item No. 702790).

Résultats obtenus avec le Caspase-3/7 Cell-Based Activity Assay Kit (Item No. 702790)

	Activité des caspases-3/7.Panel A) L’apoptose a été induite dans des cellules Jurkat (2,5 x 10⁵ cellules/puits) par un traitement avec 5 μM de staurosporine, un inducteur d’apoptose, pendant 3 heures à 37°C ; les lysats cellulaires ont été analysés pour l’activité des caspases-3/7 en suivant le protocole de la page 11. Panel B) Le contrôle positif de la caspase-3 active a été inhibé par le contrôle de l’inhibiteur, l’inhibiteur des caspases-3/7 N-Ac-DEVD-CHO
	Activation des caspases-3/7 à l’aide de divers activateurs d’apoptose. L’apoptose a été induite dans des cellules Jurkat (2,5 x 10⁵ cellules/puits) par un traitement avec 5 μM de staurosporine, 2,5 μM d’acide gambogique* ou 500 μM d’activateur d’apoptose 2*, et les échantillons ont été analysés pour l’activité des caspases-3/7 à l’aide du kit d’analyse de l’activité cellulaire des caspases-3/7. *L’acide gambogique (Réf. 14761) et l’activateur d’apoptose 2 (Réf. 10004176) sont disponibles à l’achat chez Cayman.
	Activité des caspases-3/7 à différentes densités cellulaires. L’activité des caspases-3/7 a été mesurée dans des cellules Jurkat à différentes densités cellulaires après un traitement avec 5 μM de staurosporine pendant 3 heures à 37°C.

Découvrez les améliorations clés apportées à cette nouvelle version :

• Nouveau substrat : La version mise à jour du kit de dosage utilise désormais l’Ac-DEVD-AFC (Article n° 400702) comme substrat. Il contient le même motif peptidique reconnu par les caspases-3 et caspases-7, mais avec l’aminofluorescéine (AFC) comme fluorophore. Ce nouveau substrat offre une sensibilité accrue, un signal de fond réduit et une performance globale améliorée.
• Staurosporine incluse : Le kit inclut désormais l’inducteur d’apoptose Staurosporine (Article n° 601772), qui peut être utilisé comme contrôle de traitement.
• Même protocole : Le protocole de dosage reste en grande partie inchangée, garantissant une transition en douceur avec un ajustement minimal de vos flux de travail.
• Validation supplémentaire : Nous avons effectué une validation complète de cette nouvelle version, garantissant qu’elle maintient les mêmes normes élevées en termes de précision et de fiabilité. Vous trouverez les données de validation dans la brochure du kit de la nouvelle version.
• Compatibilité : La nouvelle version est compatible avec les lecteurs de plaques standards capables de mesurer la fluorescence avec des longueurs d’onde d’excitation et d’émission de 400 et 505 nm, respectivement.

Si vous avez des questions ou des préoccupations, veuillez contacter nos scientifiques du support technique.

Références bibliographiques :

1. Cohen, G.M. Caspases: The executioners of apoptosis. Biochem. J. 326(Pt 1), 1-16 (2007).
2. McIlwain,D.R., Berger,T., and Mak,T.W. Caspase functions in cell death and disease. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 5(4), a008656 (2013).
3. Sun, G. Death and survival from executioner caspase activation. Semin. Cell Dev. Biol. 156, 66-73 (2024).
4. Sahoo, G., Samal, D., Khandayataray, P., et al. A review on caspases: Key regulators of biological activities and apoptosis. Mol. Neurobiol. 60(10), 5805-5837 (2023).
5. Fernandes-Alnemri, T., Litwack, G., and Alnemri, E.S. CPP32, a novel human apoptotic protein with homology to Caenorhabditis elegans cell death protein Ced-3 and mammalian interleukin-1β-converting enzyme. J. Biol. Chem. 269(49), 30761-30764 (1994).
6. Juna, T.S-C., McNiece, I.K., Argento, J.M., et al. Identification and mapping of Casp7, a cysteine protease resembling CPP32β, interleukin-1β converting enzyme, and CED-3. Genomics 40(1), 86-93 (1997).
7. Ghavami, S., Hashemi, M., Ande, S.R., et al. Apoptosis and cancer: Mutations within caspase genes. J. Med. Genet. 46(8), 497-510 (2009).
8. Yang, B., Ye, D., Wang, Y. Caspase-3 as a therapeutic target for heart failure.
9. Expert Opin. Ther. Targets 17(3), 255-263 (2013)
10. Hartmann, A., Hunot, S., Michel, P.P., et al. Caspase-3: A vulnerability factor and final effector in apoptotic death of dopaminergic neurons in Parkinson’s disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(6), 2875-2880 (2000).